WEKO3
アイテム
Substrate Recognition by Two Members of Glycoside Hydrolase Family 32 Involved in Fructo-oligosaccharide Metabolism in Lactobacillus acidophilus NCFM
http://hdl.handle.net/10191/18636
http://hdl.handle.net/10191/18636bfc3e15e-78a8-4e8a-8c84-00cf07ceb2bf
| 名前 / ファイル | ライセンス | アクション |
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64(2)_115-126.pdf (796.7 kB)
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| Item type | 紀要論文 / Departmental Bulletin Paper(1) | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 公開日 | 2012-07-02 | |||||
| タイトル | ||||||
| タイトル | Substrate Recognition by Two Members of Glycoside Hydrolase Family 32 Involved in Fructo-oligosaccharide Metabolism in Lactobacillus acidophilus NCFM | |||||
| タイトル | ||||||
| タイトル | Substrate Recognition by Two Members of Glycoside Hydrolase Family 32 Involved in Fructo-oligosaccharide Metabolism in Lactobacillus acidophilus NCFM | |||||
| 言語 | en | |||||
| 言語 | ||||||
| 言語 | eng | |||||
| キーワード | ||||||
| 主題Scheme | Other | |||||
| 主題 | glycoside hydrolase family 32 | |||||
| キーワード | ||||||
| 主題Scheme | Other | |||||
| 主題 | β-fructosidase, sucrose 6-phosphate hydrolase | |||||
| キーワード | ||||||
| 主題Scheme | Other | |||||
| 主題 | fructo-oligosaccharide | |||||
| キーワード | ||||||
| 主題Scheme | Other | |||||
| 主題 | Lactobacillus acidophilus NCFM | |||||
| キーワード | ||||||
| 主題Scheme | Other | |||||
| 主題 | グルコシドハイドロラーゼファミリー32 | |||||
| キーワード | ||||||
| 主題Scheme | Other | |||||
| 主題 | β- フルクトシダーゼ | |||||
| キーワード | ||||||
| 主題Scheme | Other | |||||
| 主題 | スクロース6- リン酸ハイドロラーゼ | |||||
| 資源タイプ | ||||||
| 資源タイプ識別子 | http://purl.org/coar/resource_type/c_6501 | |||||
| 資源タイプ | departmental bulletin paper | |||||
| その他のタイトル | ||||||
| その他のタイトル | 乳酸菌由来糖質加水分解酵素ファミリー32タンパク質の基質認識機構の解明 | |||||
| 著者 |
Nakai, Hiroyuki
× Nakai, Hiroyuki× Svensson, Birte× Ohtsubo, Kenichi |
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| 著者別名 | ||||||
| 識別子Scheme | WEKO | |||||
| 識別子 | 162835 | |||||
| 姓名 | 中井, 博之 | |||||
| 著者別名 | ||||||
| 識別子Scheme | WEKO | |||||
| 識別子 | 162836 | |||||
| 姓名 | Svensson, Birte | |||||
| 著者別名 | ||||||
| 識別子Scheme | WEKO | |||||
| 識別子 | 162837 | |||||
| 姓名 | 大坪, 研一 | |||||
| 抄録 | ||||||
| 内容記述タイプ | Abstract | |||||
| 内容記述 | Two fructo-oligosaccharide active enzymes, BfrA and ScrB, of glycoside hydrolase family 32 are found inLactobacillus acidophilus NCFM and belong to phylogenetic clusters of bacterial β-fructosidase and sucrose 6-phosphatehydrolase, respectively, involved in the intracellular metabolism of kesto-oligosaccharides [β-D-fructofuranosyl-(2,1)]n-β-D-fructofuranosyl-(2,1)-α-D-glucopyranose (n, 1-3) and sucrose. Recombinant ScrB, produced in Escherichia coli,showed 20-1500-fold higher catalytic efficiency (kcat/Km) toward sucrose than raffinose [α-D-galactopyranosyl-(1,6)-α-D-glucopyranosyl-(1,2)-β-D-fructofuranose] and kesto-oligosaccharides. At high concentration of sucrose (0.4-1.0 M) ScrBcatalysed formation of 1-kestose [β-D-fructofuranosyl-(2,1)-β-D-fructofuranosyl-(2,1)-α-D-glucopyranose] in 2.3-15% yield bytransglycosylation. Recombinant BfrA in contrast efficiently hydrolysed kesto-oligosaccharides, in particular 1-kestose with 70-300-fold higher kcat/Km than for sucrose and raffinose and the kcat/Km values decreased slightly with increasing degree of thepolymerization of the kesto-oligosaccharides. Neither BfrA nor ScrB degraded the β-(2,1)- and β-(2,6)-linked fructans, inulinand levan. The outcome of the present detailed specificity analysis of the β-fructosidase and sucrose 6-phosphate hydrolasetowards fructo-oligosaccharides combined with modelling of BfrA and ScrB, using the structure of Thermotoga maritima β-fructosidase as template and superimposition of β-fructose from a complex with Aspergillus awamori exo-inulinase, sucroseand 1-kestose from complexes with Cichorium intybus fructan β-(2,1)-fructosidase/1-exohydrolase, suggested that loop 1 inthe fifth blade of the characteristic GH32 β-propeller catalytic domain controls the specificity toward 1-kestose. Furthermore,a ScrB His71 is strictly conserved in the first blade of sucrose 6-phosphate hydrolase and is suggested to recognise thephosphate group of the α-glucose 6-phosphate moiety in the substrate sucrose 6-phosphate at subsite +1. | |||||
| 抄録 | ||||||
| 内容記述タイプ | Abstract | |||||
| 内容記述 | 乳酸菌Lactobacillus acidophilus NCFM でのフルクトオリゴ糖代謝に関与する２つの糖質加水分解酵素（BfrA, β- フルクトシダーゼ; ScrB, スクロース6- リン酸ハイドロラーゼ）の基質認識機構を明らかにすることを目的とし、各種組み換え酵素を用いてフルクトオリゴ糖に対する加水分解反応の速度論的解析を行った。ScrB はフルクトオリゴ糖よりスクロースに対して高い加水分解活性を示し、BfrA は短鎖なフルクトオリゴ糖に対して特異性を示すことを明らかにした。加えて、両酵素の基質特異性に関与する領域（BfrA ループ１）およびアミノ酸残基（ScrB His71）を、ホモロジーモデリング法により推定した。 | |||||
| 書誌情報 |
新潟大学農学部研究報告 en : 新潟大学農学部研究報告 巻 64, 号 2, p. 115-126, 発行日 2012-03 |
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| 出版者 | ||||||
| 出版者 | 新潟大学農学部 | |||||
| ISSN | ||||||
| 収録物識別子タイプ | ISSN | |||||
| 収録物識別子 | 03858634 | |||||
| 書誌レコードID | ||||||
| 収録物識別子タイプ | NCID | |||||
| 収録物識別子 | AN00183393 | |||||
| 著者版フラグ | ||||||
| 値 | publisher | |||||
