@article{oai:niigata-u.repo.nii.ac.jp:00028276, author = {Sakazume, Taishi and Tanaka, Kazuya and Aida, Hiroki and Ishikawa, Shinji and Nagumo, Yoshifumi and Takahashi, Yoshihiko and Ohtake, Norikuni and Sueyoshi, Kuni and Ohyama, Takuji}, issue = {1}, journal = {新潟大学農学部研究報告, 新潟大学農学部研究報告}, month = {Sep}, note = {Relative ureide method is a simple and reliable method for estimating the percentage of nitrogen depending on nitrogen fixation in field grown soybean plants. Generally, the concentrations of ureides, amides and nitrate in root bleeding xylem sap from a cut lower main stem are determined colorimetrically using an optical spectrometer. We developed a micro-scale analysis of these components in xylem sap using 2.5 μL of xylem sap for each analysis instead of 50 μL for the standard assays. Each reaction was carried out in a 1.5 mL Eppendorf centrifuge tube, and the 200 μL of reaction mixture was put into a well of a 96 wells-microplate, and measured by a microplate reader. The duplicated analysis of the standard solution gave accurate calibration for each assay. We can analyze about 200 samples in one day by the micro-scale analysis. In addition, we tried to compare the stem fluid collected by centrifuge of the lower stem segments, because root bleeding sap cannot be collected under dry conditions or at late stages such as R7 stage. Stem fluid was always collected by a portable centrifuge at 2,200 x G for 10 seconds, and the volume increased from R1 to R7 stages. The concentrations of nitrogen components and the relative ureide percent in root bleeding xylem xap and stem fluid were similar at R7, but different at R1 and R5 stages. The relative ureide percentages from stem fluid were about 50% at R1 and R5, but those from xylem sap were about 80-90%. Therefore, the stem fluid may be used for relative ureide percent only at R7 stage, when xylem sap is sometimes difficult to obtain., 相対ウレイド法は、圃場栽培ダイズの窒素固定依存率を推定するための簡便で信頼のできる方法である。一般に主茎株切断面から溢泌する導管液中の硝酸、アミド、ウレイド濃度を分光光度計を用いて比色定量する。我々は、通常の分析で用いる導管液量50 μL の代わりに、その1/20の2.5 μL を用いる微量分析法を開発した。呈色反応は、1.5 mL エッペンドルフチューブ内で行ない、呈色液200 μL を96穴マイクロプレートのウェルに入れ、マイクロプレートリーダーで吸光度を測定した。標準液を2連で測定することにより、精度の高い検量線の作成が可能であった。本分析法を用いることにより、1日に200試料を測定できた。また、生育後期(黄葉期R7)や、土壌が乾燥すると、導管液を溢泌しないことがあるため、確実に試料を採取する方法として、携帯型遠心器(2,200 x G, 10秒)を用いて茎のアポプラスト液を採取した。茎は、主茎下部から2, 3cm の長さで切り出し、1.5 mL のエッペンドルフチューブに入れて回収した。茎のアポプラスト液は、時期や気象条件によらず株あたり30-50 mg程度回収できた。各窒素成分濃度および相対ウレイドパーセントを比較したところ、R7では、導管液とほぼ同様の値が得られ、導管液の代わりに利用できる可能性が示された。しかしながら、R1, R5では、アポプラスト液のアミド,硝酸濃度が導管液よりも高く、相対ウレイドパーセントは、50%程度と導管液80-90%と異なる値となった。}, pages = {27--41}, title = {Estimation of nitrogen fixation rate of soybean (Glycine max (L.) Merr.) by micro-scale relative ureide analysis using root bleeding xylem sap and apoplast fluid in stem.}, volume = {67}, year = {2014} }